4% PFA〔多聚甲醛〕溶液是一種常用固定劑，大量用途于細胞學、組織學還有生物化學實驗中。它通過交聯(lián)蛋白質(zhì)、其他生物分子來保持樣本結(jié)構(gòu)完整性。以下是配制4% PFA溶液具體步驟：
材料準備
1. 多聚甲醛粉末：確保選用分析純或更高純度多聚甲醛。
2. 去離子水：用于溶解多聚甲醛。
3. 氫氧化鈉溶液〔約0.5 M〕：作為催化劑，促進多聚甲醛解聚為甲醛。
4. 燒杯、磁力攪拌器：用于加熱溶解。
5. pH計：檢測最終溶液酸堿度。
操作步驟
1. 稱量多聚甲醛
根據(jù)目標體積計算所需多聚甲醛質(zhì)量。例如，配制1升4% PFA溶液要稱取40克多聚甲醛。
2. 加入去離子水
將稱好多聚甲醛放入干凈燒杯中，加入適量去離子水〔通常為總?cè)芤后w積一半左右〕，輕輕搖晃使初步分散。
3. 加熱和攪拌
使用磁力攪拌器緩慢加熱至6070°C，并持續(xù)攪拌直至多聚甲醛完全溶解。此時溶液應出現(xiàn)清澈透明狀態(tài)。
4. 添加氫氧化鈉溶液
于溶液接近完全溶解時，逐滴加入0.5 M氫氧化鈉溶液，以催化反應加速多聚甲醛分解為甲醛。和此同時監(jiān)測溶液pH值，通?？刂朴?.07.5之間。
5. 調(diào)整總體積并定容
當溶液達到預期濃度后，用去離子水補充至目標體積〔如1升〕，并再次攪拌均勻。
6. 過濾和分裝
使用0.2微米濾膜過濾去除也許存于不溶性顆粒，然后將溶液分裝保存于無菌容器內(nèi)。注意避光存放，避免長時間暴露于空氣中導致失效。
注意事項
整個操作需于通風優(yōu)良環(huán)境中進行，因為甲醛具有揮發(fā)性、刺激性氣味。
配制過程中要控制溫度、pH值，否則也許導致溶液不穩(wěn)固。
一直儲存時建議添加少量疊氮化鈉作為防腐劑。
通過上述步驟，即可成功配制出符合實驗需求4% PFA溶液。這種溶液于使用前還需根據(jù)具體實驗要求進一步稀釋或處理，以確保最佳效果。
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